影響ELISA試劑盒靈敏度常出現(xiàn)的問題及解決辦法

ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。上海研域生物將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)一下，以期給同行帶來—些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

1、超過有效期。試劑盒必須在有效期內(nèi)使用，超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號。

2、試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存，受高溫影響。

3、試劑、樣品用前未平衡至室溫

4、加入試劑的體積和時間有誤，移液器計(jì)量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔。

5、洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力，

6、孵育時間及孵育溫度未達(dá)到要求，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整。

7、洗板次數(shù)過多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求，洗滌沖擊力太大，浸泡時間太長等，

8、顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。

9、底物作用時間不夠，

10、燕餾水水質(zhì)有問題

ELISA試劑盒靈敏度出現(xiàn)問題相應(yīng)的解決方法

1、實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)試劑未過期,

2、不要將試劑盒長時間置于常溫下，按便用規(guī)定儲藏。

3、試劑、樣品用前平衡至室溫

4、確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當(dāng)。校正移液器，移液器與吸晚配合要緊密吻合。移液不宣太快，盡量排放完。

5、確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如愛氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗千凈，確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未受污染。

6、孵育溫度應(yīng)控制在37-38C，孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作。保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。

7、嚴(yán)格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù)，

8、顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合。

9、準(zhǔn)確定時。

10、測定燕餾水配制試劑對酶免疫法的影響。