ELISA試劑盒技術要點

           ELISA試劑盒的技術要點包括三個方面：試劑的制備、反應條件的選擇和操作的標準化。一、試劑的制備ELISA的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和與標記酶直接關聯的酶反應底物。以下敘述這些試劑的原料和制備方法。
         （一）固相載體可作 ELISA試劑盒中載體的物質很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體或蛋白質抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。
         （二）抗原和抗體在 ELISA試劑盒實施過程中，抗原和抗體的質量是實驗是否成功的關鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。 ELISA試劑盒 所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養物等，一般含有多種抗原成分，需經純化，提取出特定的抗原成分后才可應用，因此也稱提純抗原（purifiedantigen）。重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質少。
        （三）免疫吸附劑固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被（coating）。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（zui常用的為pH9.6的碳酸緩沖液）中，加于ELISA板孔中在4℃，經清洗后即可應用。如果包被液中的蛋白質濃度過低，ELISA試劑盒固相載體表面有能被此蛋白質*覆蓋，其后加入的血清標本和酶結合物中的蛋白質也會部分地吸附于固相載體表面，zui后產生非特異性顯色而導致本底偏高。